RNA提取原理

RNA提取原理用Trizol的溶液提取，将总RNA与DNA和蛋白质分离。Trizol是一种酸性溶液，含有**酸胍(GITC)、苯*和氯仿。GITC不可逆地使蛋白质和RNase变性。随后进行离心。在酸性条件下，总RNA保留在上层水相中，而大部分DNA和蛋白质保留在中间相或下层有机相中。然后通过用异*沉淀回收总RNA。RNase酶可以通过加入吡咯碳酸二乙酯(DEPC)来灭活。

RNA提取时，加氯仿后分三层：水相(含rna,可能还有少量DNA），中间白色薄层（应该是蛋白和DNA），下层有机相（氯仿和蛋白等）

氯仿是分子量比较大的有机溶剂，在提取RNA时，氯仿可以有效的使有机相和无机相迅速分离。DNA提取过程有机相中主要是*和蛋白结合，从而使得蛋白和DNA脱离，DNA进入水相。但是在RNA的提取过程就要避免蛋白和DNA脱离，否则DNA会释放到水相。不管有*也好，没有*也好，氯仿本身也对蛋白有变性作用，剧烈的震荡，很容易使得DNA的亲水基团，与水相接触。所以不要剧烈震荡。

异*的作用是通过-OH的疏水作用使得RNA或者DNA链中的亲水基团受到保护，等同于沉淀，但是这是个反应时发生在水相中，与前面的氯仿不矛盾。

细胞中还有许多种类和功能不一的小型RNA，像是组成剪接体的snRNA，负责rRNA成型的snoRNA，以及参与RNAi作用的miRNA与siRNA等，可调节基因表达。而其他如I、II型内含子、RNaseP、HDV、核糖体RNA等等都有催化生化反应过程的活性，即具有酶的活性，这类RNA被称为核酶。

在各种生物活动中，RNA起着至关重要的作用。脱氧核糖没有2‘-OH.RNA的2‘-OH中的O（氧原子）可以在*氧根（水）和*结合的时候靠近3’碳原子下面的磷酸基团形成包含5个共价键的P（5个P-O）。

RNA和DNA属于核酸，加上脂质、蛋白质和碳水化合物。核糖的2位碳上连有*基为RNA的一个重要结构特点。这类*基使得RNA双链的结构应与A型构象最接近，不过，在单链的某些二核苷酸环境下，也有极小的可能形成DNA最常见的B型螺旋构象。

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